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亲和柱的应用

应用：牛奶中m1的测定

参考方法gb 541337-2010 食品安全- 乳和乳制品中m1 的测定

样品前处理

称取50g牛奶到具塞离心管中，在水浴中加热到35-37℃，4000转离心15min，除去上层乳脂，全部样品待过柱净化

样品过柱净化

1. 将亲和柱sbhl-20-0245连接于10ml或50ml注射管下。

2. 将处理好的样品全部通过亲和柱，控制试样以2ml/min-3ml/min稳定的流速过柱。注意：空气不能通过柱体

3. 以稳定的流速淋洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2ml-3ml空气通过柱体。

4. 洗脱，流速为1ml/min-2ml/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

亲和柱亲和层析技术原理

iac也是色谱技术的一种,可称为色谱技术,是一种利用抗原特-可逆结合特性的spe技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原,用适当的缓冲液和合适的保存方法,柱可以再生备用。其提纯效率-,通常只需一次就可达到1000～10000倍的纯化效果(王泽永,2002)。

亲和柱亲和层析过程中的注意事项

1、上样

亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、ph、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

2、洗脱

亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种：特-洗脱和非特-洗脱。

亲和柱——亲和层析的应用

抗原和利用抗原、之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从中分离其对应的。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低，用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离，而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原，经动物后制备，将与适当基质偶联形成亲和吸附剂，就可以对发酵液中的所需蛋白质进行分离纯化。抗原、间亲和力一般比较强，其解离常数为108－10?12m，所以洗脱时是比较困难的，通常需要较-的洗脱条件。可以采取适当的方法如改变抗原、种类或使用类似物等来降低二者的亲和力，以便于洗脱。

另外金黄色球菌蛋白aproteina能够与球蛋白gigg结合，可以用于分离各种igg。